骨肉瘤组织中p53蛋白表达与PCNA的相关性研究
作者：于秀淳 刘晓平 曲在屏 周银 丁吉元
单位：于秀淳 刘晓平 曲在屏 周银 丁吉元(济南军区总医院骨病科 济南市 250031)
关键词：骨肉瘤；基因产物，p53；PCNA；免疫组化
肿瘤000415 摘要：目的 研究骨肉瘤组织中p53蛋白表达与PCNA的相关性。方法 应用免疫组化方法测定33例骨肉瘤中p53基因、PCNA的表达，均行手术治疗，19例获得平均1年7个月的随访，11例发生肺转移(6例死亡)，3例术后复发。结果 p53阳性表达率为57.6 %，预后良好组p53阳性表达率明显低于预后不良组；PCNA阳性表达率为66.7 %。结论 p53蛋白阳性表达的骨肉瘤有较强的增殖能力。
中图分类号：R738.1 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04-0279-02
, 百拇医药
INVESTIGATION ON THE EXPRESSION OF p53 PROTEIN AND PCNA IN OSTEOSARCOMA
YU Xiu-chun
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
LIU Xiao-ping
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
QU Zai-ping et al.
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To investigate the expression of p53 protein and PCNA and their relationship with the prognosis of patients with osteosarcoma.Methods In 33 cases of osteosarcoma, the immunohistochemical method was used to determine the expression of p53 protein and PCNA.All 33 cases were operated and 19 cases were followed up for a mean time of 1 year and 7 months postoperatively.Results Lung metastases occurred in 11 cases and in 3 cases the original sarcoma reccured.The positive expression rate of p53 protein was 57.6 % and this was apparently lower in the group of patients with better prognosis.The positive rate of expression of PCNA was 66.7 %.19 cases were followed up and 10 cases with positive PCNA expression showed bad prognosis.Conclusion Osteosarcoma patients with positive expression of p53 protein had stronger proliferation ability.
, 百拇医药
Key words： Osteosarcoma； Gene products,p53； PCNA； Immunohistochemistry
p53基因的失活是导致恶性肿瘤发生的常见因素，可通过免疫组化的方法予以测定，并已证明在骨肉瘤组织中有异常突变型p53基因的表达[1，2]。增殖细胞核抗原(PCNA)是反映肿瘤细胞增殖能力的一项指标。为探讨骨肉瘤组织中p53基因蛋白表达与肿瘤细胞增殖能力的关系及对预后的影响，作者应用免疫组化的方法对33例骨肉瘤组织的p53基因和PCNA表达进行了测定，现报道如下：
材料与方法
一、临床资料
33例中男24例，女9例，平均年龄20.6岁(11～40岁)。部位：股骨12例，胫骨16例，腓骨4例，肱骨1例。所有诊断均经病理组织学证实。参照Enneking外科分期标准，Ⅱ A 5例，ⅡB23例，Ⅲ B 5例。所有患者均行手术治疗，截肢或关节离断术22例，瘤段切除假体置换术6例，肿瘤扩大切除术5例。19例获得平均1年7个月的随访(6个月～4年7个月)。预后不良组14例，其中11例发生肺转移(6例死亡)，3例术后复发。预后良好组5例无复发、转移。
, http://www.100md.com
二、标本的选择及处理
选择含有肿瘤细胞丰富的切片之对应蜡块为观察标本，连续切片，片厚5 μm。
三、免疫组化染色
所有试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，免疫组化染色采用链菌素亲生物素—过氧化物酶法(S-P法)。每次试验均设立阳性和阴性对照，以PBS置换一抗作空白对照。
四、结果判断
p53基因蛋白和PCNA染色均位于细胞核，以细胞核为棕色或棕褐色为阳性细胞。每张切片观察10个高倍镜视野，以10个视野阳性细胞的平均数所占比例来判断结果。
p53基因蛋白表达分级标准：阳性细胞数小于1/3者为阴性(-)，大于1/3者为阳性(+)(见封三图5)。
, 百拇医药
图5 骨肉瘤组织胞核呈p53阳性着色(棕色)SP法×400
PCNA分级标准：阳性细胞数小于5 %为阴性(-)，>5 %为阳性(见封三图6)。
图6 骨肉瘤组织胞核呈PCNA阳性着色(棕褐色)SP法×100
结果
一、p53基因蛋白在骨肉瘤组织中的表达
本组19例标本的p53基因蛋白表达为阳性，阳性表达率为57.6 %，通过对随访的19例患者的对比分析，发现预后良好组，p53阳性表达率为20 %(1/5)，明显低于预后不良组(78.5 %，11/14)，P<0.05。
二、PCNA在骨肉瘤组织中的表达
, 百拇医药
PCNA阳性表达率为66.7 %(22/33)，分析随访19例，发现阳性表达的10例，均为预后不良组(71.4 %)，而预后良好组均不表达(P<0.01)。
三、p53基因蛋白与PCNA表达的关系
p53基因蛋白和PCNA表达具有明显的一致性(P<0.025)(见附表)。在16例p53基因和PCNA表达同时为阳性的患者中，7例获得随访，6例发生肺转移(4例死亡)，1例术后复发，表明了PCNA和p53基因蛋白同时表达为阳性的患者临床预后更差。
附表 骨肉瘤组织中p53基因与PCNA表达的关系
n
p53
χ2值
, 百拇医药
P值
-
+
PCNA
-
11
8
3
6.203
<0.025
+
22
6
16
, 百拇医药
讨论 p53突变是p53基因失活最常见的基因改变，且多为无义突变，产生突变型的p53蛋白。一般认为免疫组化测定到的p53蛋白表达，即表明此细胞的p53基因已发生突变，这一观点已被体外细胞内转染试验所证实[3]。许多研究结果证明在骨肉瘤组织中存在p53基因的突变。王臻等[1]发现骨肉瘤组织中p53蛋白表达阳性率为70%，并且在高危组的表达明显高于低危组。董玉昌等[2]应用流式细胞仪的方法研究了15例骨肉瘤组织的p53蛋白表达，发现阳性表达率达100 %；不同的病理类型之间p53阳性表达率并无差异，随访的结果表明p53蛋白高表达的患者预后较差。本研究33例骨肉瘤阳性表达率为57.6 %。略低于文献报道[1，2]。可能与检测方法的不同或样本数有关。对19例获得随访患者的结果分析，发现预后不良组的p53阳性表达率明显高于预后良好组，进一步证明了p53基因突变存在于骨肉瘤组织中，并对预后有一定的影响。
检测PCNA可以客观评价肿瘤细胞增殖状态，正确判断其生物学行为及评估预后。大量的研究证明PCNA高表达的骨肉瘤者有较差的临床预后[1，4]。本组对33例骨肉瘤组织的免疫组化研究发现PCNA阳性表达率为66.7 %，低于文献报道[1，4]。随访结果表明预后不良组的PCNA阳性表达率明显高于预后良好组，证明了PCNA表达与骨肉瘤预后的关系。
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p53基因和PCNA表达是从不同侧面反映了肿瘤细胞的生物学行为，两者均与细胞周期有关，突变型p53可促进细胞由G0/G1期进入S期，而PCNA表达在S期最高，推测两者之间有一定关系。陆爱平等[5]对大肠癌的研究中发现突变型p53蛋白阳性表达与DNA修复能力的下降明显相关；随PCNA阳性细胞的增多，p53蛋白阳性表达率也随之增高。董玉昌等[2]报道DNA高异倍体的骨肉瘤，p53蛋白也有高表达，表明细胞增殖高度活跃。本研究的33例中，16例的PCNA和p53基因蛋白同时表达为阳性，经统计学分析两者具有明显的一致性，表明突变型p53蛋白已失去对细胞增殖的负性调节作用，具有促进细胞增殖的作用。从而证明了p53蛋白表达的肿瘤细胞有较强的增殖能力。16例同时呈阳性表达中7例获得随访，6例肺转移(4例死亡)，1例复发，表明p53和PCNA同时阳性表达的患者将有更差的临床预后。
作者简介：于秀淳，男，硕士，副主任医师
, http://www.100md.com
参考文献
[1]王 臻，梁 戈，黄耀添，等.骨肉瘤p53、C-erbB、C-myc的表达及与预后的关系〔J〕.中华骨科杂志，1995，15(9)：600
[2]董玉昌、左连富、丁文元，等.骨肉瘤、骨巨细胞瘤p53基因蛋白表达的定量研究〔J〕.中华骨科杂志，1996，16(5)：324
[3]Sarkis AS,Dalbagni G,Cordon-Cardo C,et al,Nuclear overexpression of p53 protein in transitional cell bladder carcinoma:a marker for disease progression〔J〕.J Natl Cancer Inst,1993,85(1):53
[4]陶惠民、杨迪生、范顺武.骨肉瘤细胞PCNA测定的临床意义〔J〕.中华骨科杂志，1996，16(5)：321
[5]陆爱平、李吉友.DNA损伤修复能力.p53蛋白及增殖细胞核抗原在大肠癌发生过程中的变化〔J〕.中国肿瘤临床，1997，24(12)：926
(收稿日期：1998-03-23；修回日期：1998-07-21), 百拇医药
单位：于秀淳 刘晓平 曲在屏 周银 丁吉元(济南军区总医院骨病科 济南市 250031)
关键词：骨肉瘤；基因产物，p53；PCNA；免疫组化
肿瘤000415 摘要：目的 研究骨肉瘤组织中p53蛋白表达与PCNA的相关性。方法 应用免疫组化方法测定33例骨肉瘤中p53基因、PCNA的表达，均行手术治疗，19例获得平均1年7个月的随访，11例发生肺转移(6例死亡)，3例术后复发。结果 p53阳性表达率为57.6 %，预后良好组p53阳性表达率明显低于预后不良组；PCNA阳性表达率为66.7 %。结论 p53蛋白阳性表达的骨肉瘤有较强的增殖能力。
中图分类号：R738.1 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04-0279-02
, 百拇医药
INVESTIGATION ON THE EXPRESSION OF p53 PROTEIN AND PCNA IN OSTEOSARCOMA
YU Xiu-chun
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
LIU Xiao-ping
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
QU Zai-ping et al.
(Jinan Military General Hospital,Jinan 250031 China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To investigate the expression of p53 protein and PCNA and their relationship with the prognosis of patients with osteosarcoma.Methods In 33 cases of osteosarcoma, the immunohistochemical method was used to determine the expression of p53 protein and PCNA.All 33 cases were operated and 19 cases were followed up for a mean time of 1 year and 7 months postoperatively.Results Lung metastases occurred in 11 cases and in 3 cases the original sarcoma reccured.The positive expression rate of p53 protein was 57.6 % and this was apparently lower in the group of patients with better prognosis.The positive rate of expression of PCNA was 66.7 %.19 cases were followed up and 10 cases with positive PCNA expression showed bad prognosis.Conclusion Osteosarcoma patients with positive expression of p53 protein had stronger proliferation ability.
, 百拇医药
Key words： Osteosarcoma； Gene products,p53； PCNA； Immunohistochemistry
p53基因的失活是导致恶性肿瘤发生的常见因素，可通过免疫组化的方法予以测定，并已证明在骨肉瘤组织中有异常突变型p53基因的表达[1，2]。增殖细胞核抗原(PCNA)是反映肿瘤细胞增殖能力的一项指标。为探讨骨肉瘤组织中p53基因蛋白表达与肿瘤细胞增殖能力的关系及对预后的影响，作者应用免疫组化的方法对33例骨肉瘤组织的p53基因和PCNA表达进行了测定，现报道如下：
材料与方法
一、临床资料
33例中男24例，女9例，平均年龄20.6岁(11～40岁)。部位：股骨12例，胫骨16例，腓骨4例，肱骨1例。所有诊断均经病理组织学证实。参照Enneking外科分期标准，Ⅱ A 5例，ⅡB23例，Ⅲ B 5例。所有患者均行手术治疗，截肢或关节离断术22例，瘤段切除假体置换术6例，肿瘤扩大切除术5例。19例获得平均1年7个月的随访(6个月～4年7个月)。预后不良组14例，其中11例发生肺转移(6例死亡)，3例术后复发。预后良好组5例无复发、转移。
, http://www.100md.com
二、标本的选择及处理
选择含有肿瘤细胞丰富的切片之对应蜡块为观察标本，连续切片，片厚5 μm。
三、免疫组化染色
所有试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，免疫组化染色采用链菌素亲生物素—过氧化物酶法(S-P法)。每次试验均设立阳性和阴性对照，以PBS置换一抗作空白对照。
四、结果判断
p53基因蛋白和PCNA染色均位于细胞核，以细胞核为棕色或棕褐色为阳性细胞。每张切片观察10个高倍镜视野，以10个视野阳性细胞的平均数所占比例来判断结果。
p53基因蛋白表达分级标准：阳性细胞数小于1/3者为阴性(-)，大于1/3者为阳性(+)(见封三图5)。
, 百拇医药
图5 骨肉瘤组织胞核呈p53阳性着色(棕色)SP法×400
PCNA分级标准：阳性细胞数小于5 %为阴性(-)，>5 %为阳性(见封三图6)。
图6 骨肉瘤组织胞核呈PCNA阳性着色(棕褐色)SP法×100
结果
一、p53基因蛋白在骨肉瘤组织中的表达
本组19例标本的p53基因蛋白表达为阳性，阳性表达率为57.6 %，通过对随访的19例患者的对比分析，发现预后良好组，p53阳性表达率为20 %(1/5)，明显低于预后不良组(78.5 %，11/14)，P<0.05。
二、PCNA在骨肉瘤组织中的表达
, 百拇医药
PCNA阳性表达率为66.7 %(22/33)，分析随访19例，发现阳性表达的10例，均为预后不良组(71.4 %)，而预后良好组均不表达(P<0.01)。
三、p53基因蛋白与PCNA表达的关系
p53基因蛋白和PCNA表达具有明显的一致性(P<0.025)(见附表)。在16例p53基因和PCNA表达同时为阳性的患者中，7例获得随访，6例发生肺转移(4例死亡)，1例术后复发，表明了PCNA和p53基因蛋白同时表达为阳性的患者临床预后更差。
附表 骨肉瘤组织中p53基因与PCNA表达的关系
n
p53
χ2值
, 百拇医药
P值
-
+
PCNA
-
11
8
3
6.203
<0.025
+
22
6
16
, 百拇医药
讨论 p53突变是p53基因失活最常见的基因改变，且多为无义突变，产生突变型的p53蛋白。一般认为免疫组化测定到的p53蛋白表达，即表明此细胞的p53基因已发生突变，这一观点已被体外细胞内转染试验所证实[3]。许多研究结果证明在骨肉瘤组织中存在p53基因的突变。王臻等[1]发现骨肉瘤组织中p53蛋白表达阳性率为70%，并且在高危组的表达明显高于低危组。董玉昌等[2]应用流式细胞仪的方法研究了15例骨肉瘤组织的p53蛋白表达，发现阳性表达率达100 %；不同的病理类型之间p53阳性表达率并无差异，随访的结果表明p53蛋白高表达的患者预后较差。本研究33例骨肉瘤阳性表达率为57.6 %。略低于文献报道[1，2]。可能与检测方法的不同或样本数有关。对19例获得随访患者的结果分析，发现预后不良组的p53阳性表达率明显高于预后良好组，进一步证明了p53基因突变存在于骨肉瘤组织中，并对预后有一定的影响。
检测PCNA可以客观评价肿瘤细胞增殖状态，正确判断其生物学行为及评估预后。大量的研究证明PCNA高表达的骨肉瘤者有较差的临床预后[1，4]。本组对33例骨肉瘤组织的免疫组化研究发现PCNA阳性表达率为66.7 %，低于文献报道[1，4]。随访结果表明预后不良组的PCNA阳性表达率明显高于预后良好组，证明了PCNA表达与骨肉瘤预后的关系。
, http://www.100md.com
p53基因和PCNA表达是从不同侧面反映了肿瘤细胞的生物学行为，两者均与细胞周期有关，突变型p53可促进细胞由G0/G1期进入S期，而PCNA表达在S期最高，推测两者之间有一定关系。陆爱平等[5]对大肠癌的研究中发现突变型p53蛋白阳性表达与DNA修复能力的下降明显相关；随PCNA阳性细胞的增多，p53蛋白阳性表达率也随之增高。董玉昌等[2]报道DNA高异倍体的骨肉瘤，p53蛋白也有高表达，表明细胞增殖高度活跃。本研究的33例中，16例的PCNA和p53基因蛋白同时表达为阳性，经统计学分析两者具有明显的一致性，表明突变型p53蛋白已失去对细胞增殖的负性调节作用，具有促进细胞增殖的作用。从而证明了p53蛋白表达的肿瘤细胞有较强的增殖能力。16例同时呈阳性表达中7例获得随访，6例肺转移(4例死亡)，1例复发，表明p53和PCNA同时阳性表达的患者将有更差的临床预后。
作者简介：于秀淳，男，硕士，副主任医师
, http://www.100md.com
参考文献
[1]王 臻，梁 戈，黄耀添，等.骨肉瘤p53、C-erbB、C-myc的表达及与预后的关系〔J〕.中华骨科杂志，1995，15(9)：600
[2]董玉昌、左连富、丁文元，等.骨肉瘤、骨巨细胞瘤p53基因蛋白表达的定量研究〔J〕.中华骨科杂志，1996，16(5)：324
[3]Sarkis AS,Dalbagni G,Cordon-Cardo C,et al,Nuclear overexpression of p53 protein in transitional cell bladder carcinoma:a marker for disease progression〔J〕.J Natl Cancer Inst,1993,85(1):53
[4]陶惠民、杨迪生、范顺武.骨肉瘤细胞PCNA测定的临床意义〔J〕.中华骨科杂志，1996，16(5)：321
[5]陆爱平、李吉友.DNA损伤修复能力.p53蛋白及增殖细胞核抗原在大肠癌发生过程中的变化〔J〕.中国肿瘤临床，1997，24(12)：926
(收稿日期：1998-03-23；修回日期：1998-07-21), 百拇医药